血余炭霉菌和酵母菌总数检测执行哪个药典标准？编号与要点说明

血余炭为人头发经高温煅制而成的炭化饮片，属于动物类中药材，其微生物污染风险与原料来源及炮制工艺密切相关。霉菌和酵母菌总数检测是该品种微生物限度检查的核心项目之一，用于评估饮片的真菌污染水平及卫生学质量。本文围绕其执行的药典标准体系展开，依次说明检测原理与机制、检测对象与限度要求、供试液制备、平皿法与薄膜过滤法两种计数途径、培养基适用性与方法验证要求，以及菌数判定与结果报告规则，为实际检测工作提供系统参照。

检测原理与机制

霉菌和酵母菌总数检测的原理，是在规定培养基与培养条件下，使样品中存活的真菌细胞或孢子萌发形成肉眼可见的菌落，再依据菌落形成单位对样品中的活菌数量进行定量。所选培养基以 Rose Bengal 琼脂与沙氏葡萄糖琼脂为代表，其成分兼顾真菌营养需求与对部分细菌生长的抑制。培养温度与时间依据药典微生物计数法通则设定，通常在较低温度下培养数日，使霉菌与酵母菌得以形成典型菌落。计数结果反映的是单位供试样品中可培养真菌的数量水平，属于卫生学指示指标。

检测对象与微生物限度要求

检测对象为血余炭饮片本身，执行《中国药典》四部微生物限度检查相关通则，主要涉及通则 1105 微生物计数法、通则 1107 非无菌药品微生物限度标准，以及通则 1108 中药饮片微生物限度检查法的专门规定。血余炭因属动物来源且经高温煅制，其霉菌和酵母菌总数限度按中药饮片相应类别执行，即需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数不得超出通则 1107 表格中对应的限度值。同时不得检出特定控制菌，具体项目依饮片给药途径与工艺特点确定。限度判定以一次检验结果结合复试规则综合评价。

样品制备与供试液制备

取样应遵循随机与代表性原则，自包装不同部位抽取规定量样品，取样操作在洁净条件下进行，避免二次污染。供试液制备时，称取适量血余炭，加入 pH 7.0 无菌氯化钠蛋白胨缓冲液或其他适宜稀释液，充分振摇使微生物分散均匀，制成 1:10 的均匀供试液。血余炭质地疏松且为炭化粉末，易漂浮于液面，需延长振摇或适当浸泡，使附着微生物充分释放至液相。必要时可加入少量无菌聚山梨酯 80 以改善润湿分散。随后按十倍递增稀释法制备各级稀释度供试液，全部操作须在一小时内完成。

微生物计数法——平皿法与薄膜过滤法

平皿法倾注法与涂布法，适用于微生物负荷适中且样品基质无明显抑菌或扩散干扰的情形。操作时取规定级稀释度的供试液一毫升置平皿内，注入冷却至适宜温度的培养基，混匀凝固后倒置培养；亦可采用涂布方式将供试液均匀分布于凝固培养基表面。薄膜过滤法则适用于抑菌性较强或含不溶性微粒较多的样品，取供试液通过孔径约 0.45 微米的微孔滤膜，以稀释液分次冲洗滤膜以去除干扰物，再将滤膜贴附于固体培养基表面培养。血余炭炭末颗粒细小，若平皿法计数困难，宜优先采用薄膜过滤法并增加冲洗量。

培养基适用性与方法验证

检测前须完成培养基适用性检查，涵盖计数培养基的促生长能力、抑制能力及指示特性的确认，所用菌株为药典规定的白色念珠菌、黑曲霉等标准菌株，接种量不大于 100 菌落形成单位。方法验证针对供试液制备方法与计数方法本身，验证项目适用性与回收率测定，要求试验组菌落数与对照组相比的回收比值符合通则规定范围，证明血余炭基质经适当处理后不干扰真菌计数。若回收比值不符合要求，应调整稀释液种类、增加冲洗次数或改用薄膜过滤法，重新验证直至方法成立。验证数据随检验记录一并保存备查。

菌数限度判定与结果报告

计数时选取菌落数在规定范围内的平皿，霉菌和酵母菌计数以平均菌落数乘以稀释倍数报告，菌落数蔓延生长时应避开蔓延区域计数或重新试验。结果按有效数字修约规则报告，必要时以十的指数形式表示。判定环节将报告值与通则 1107 规定的霉菌和酵母菌总数限度比较：若各供试品平板均无菌落生长或计数值低于限度，判定符合规定；超出限度时须按复试规则重新取样检验两次，以三次结果综合判定。报告内容应载明检验依据、方法类型、稀释度、菌落数计算过程与判定结论，保证结果可追溯。

常见问题与注意事项

检测报告包含哪些内容？

报告载明检验依据的药典通则、供试液制备方法、计数方式（平皿法或薄膜过滤法）、各稀释度菌落数、计算与修约过程、限度标准及符合性结论，附培养基适用性与方法验证信息，供质量放行与留档追溯使用。

送检血余炭样品时应与实验室确认哪些要点？

应说明样品为动物来源煅制饮片、拟执行的药典通则项目，确认取样量、包装完整性与寄送条件，并提前沟通是否需采用薄膜过滤法以及是否已有可沿用的方法验证数据，以避免重复验证。

血余炭微生物限度检测费用主要受什么因素影响？

费用与检测项目组合、是否需重新开展方法学验证、供试液制备难度及是否需多稀释度多平皿重复计数相关；血余炭炭粉分散性差导致操作与验证工作量增加时，检测成本相应上升。