被动转移皮肤敏感性测试技术综述
被动转移皮肤敏感性测试，是体外评估化学品、化妆品原料、医疗器械浸提液及生物制剂等物质潜在致敏性的关键技术体系。该体系通过将供体生物体中与致敏反应相关的关键因子（如特异性IgE抗体、致敏T细胞或血清）被动转移至未经致敏的受体动物或体外培养系统，从而在受控条件下重现和评价皮肤的免疫学反应。其核心优势在于避免了直接对潜在受试者进行致敏原暴露的伦理与安全风险，实现了致敏性的间接、客观评估。
被动转移测试主要围绕I型（速发型）和IV型（迟发型）超敏反应展开，对应不同的检测项目与原理。
1.1 针对I型超敏反应（IgE介导）的检测
被动皮肤过敏试验：此为经典方法。原理是将疑似致敏物经系统暴露后动物（供体）的血清，皮内注射至正常动物（受体）的背部真皮层。经过一定潜伏期（通常为24-72小时）使受体皮肤靶部位致敏后，通过静脉注射含有伊文思蓝等染料与受试物的激发混合液。若血清中含有针对受试物的特异性IgE抗体，则会与皮肤肥大细胞表面的FcεRI受体结合，再次接触抗原时引发肥大细胞脱颗粒，释放组胺等血管活性物质，导致局部血管通透性增加，染料渗出并在皮内形成蓝斑。通过测量蓝斑直径或提取染料进行比色定量，可评价致敏强度。
人嗜碱性粒细胞脱颗粒试验及其改良方法：原理是将人源致敏血清或含特异性IgE的患者血清与供体的嗜碱性粒细胞（或人源化细胞系，如RBL-2H3细胞系转染人FcεRI受体）共同孵育进行被动致敏，随后加入受试物激发。通过检测细胞脱颗粒标志物（如组胺、β-氨基己糖苷酶）的释放率，或借助流式细胞术检测细胞表面活化标记物（如CD63、CD203c）的表达上调，来定量评价受试物引发I型超敏反应的潜能。
1.2 针对IV型超敏反应（T细胞介导）的检测
局部淋巴结试验的转移变体：传统LLNA用于直接评估致敏性。其被动转移变体则是将经受试物处理的供体小鼠引流淋巴结细胞（富含致敏T细胞）过继转移至同系 naive 受体小鼠。随后，将受试物局部涂抹于受体小鼠耳部进行激发。通过比较激发部位与对照部位的耳厚差、细胞浸润程度或淋巴细胞增殖指标，来证实致敏T细胞的存在及其功能。
T细胞克隆/系增殖与细胞因子释放检测：从已致敏个体或动物分离抗原特异性T细胞克隆或系，在体外与受试物及抗原呈递细胞共培养。通过检测T细胞的增殖指数（如采用CFSE稀释法或³H-胸腺嘧啶核苷掺入法）以及释放的关键细胞因子（如IFN-γ, IL-17, IL-22等）的浓度，来直接评估受试物激活特异性致敏T细胞的能力。
被动转移测试广泛应用于多个需要评估物质致敏风险的领域：
化学品与农药安全评估：根据全球化学品统一分类和标签制度等法规要求，对新化学物质进行致敏性分类和标签。
化妆品与个人护理品原料筛查：在产品研发阶段，评估香料、防腐剂、染发剂等常用原料的潜在致敏性，以符合欧盟化妆品法规等要求。
医疗器械生物相容性评价：依据ISO 10993系列标准，特别是针对与人体长期或重复接触的器械材料（如聚合物、胶粘剂、浸提液），评估其可能引起的迟发型超敏反应风险。
药品安全性评价：评估生物制剂（如单克隆抗体、重组蛋白）及小分子药物可能诱导的免疫原性及过敏反应。
食品与食品添加剂致敏性研究：辅助研究某些食品蛋白质的致敏潜力，特别是当直接口服激发存在困难时。
职业过敏原鉴定：用于鉴定和确认工作环境中特定化学物或生物源性物质是否为职业性过敏原。
相关检测方法根据终点指标的不同，可分为体内、体外和体外-体内结合法。
体内观察法：以PCA试验为代表，直接观察受体动物皮肤局部的蓝染反应，进行半定量或定量分析。
细胞功能分析法：包括嗜碱性粒细胞/肥大细胞脱颗粒检测、T细胞增殖与活化检测。这些方法通常在96孔板中进行，依赖于特定的生物化学或细胞生物学检测技术。
分子标记检测法：利用流式细胞术检测细胞表面活化标志物，或使用酶联免疫吸附法、液相芯片技术等检测释放的介质（组胺、类胰蛋白酶、细胞因子）。
过继转移激发法：结合了细胞转移（体内或体外致敏细胞的获取）与体内激发，是评估细胞免疫介导的迟发型超敏反应的有力工具。
完整的被动转移测试体系需要一系列精密仪器支撑：
流式细胞仪：是核心设备之一。用于分析嗜碱性粒细胞表面CD63、CD203c等活化标志物的表达，或对过继转移的淋巴细胞亚群进行分型和纯度鉴定。其功能在于快速、多参数、定量分析单个细胞的表型与功能状态。
酶标仪：具备紫外-可见光及荧光检测功能。用于读取ELISA板中细胞因子、组胺、β-氨基己糖苷酶等物质的浓度；也可用于CFSE增殖试验的荧光强度检测，以及染料提取液的吸光度测定。其功能是实现高通量、自动化的吸光度与荧光信号定量。
液相芯片 multiplex 分析系统：可同时定量检测单个样本中数十种细胞因子、趋化因子的浓度，全面评估免疫反应的极化类型和强度，功能在于实现多目标分子的高效并行分析。
活体成像系统：用于PCA试验中，可对皮肤蓝斑进行精确定量成像和面积分析，减少主观误差，功能在于提供客观的形态学定量数据。
细胞培养与处理设备：包括二氧化碳培养箱（维持细胞活性）、生物安全柜（提供无菌操作环境）、离心机（用于细胞分离与洗涤）、自动细胞计数器等，功能在于确保体外细胞试验的标准化与可重复性。
微量注射与采样设备：如精密微量注射器（用于皮内精准注射）、毛细管采血系统等，功能在于实现体内试验操作的精确性与一致性。
综上所述，被动转移皮肤敏感性测试是一套多层次、多终点的综合性技术体系。通过结合体内过继转移模型与体外细胞分子检测技术，它能够从抗体介导和细胞介导两条核心免疫学路径，科学地揭示受试物的致敏机制与强度，为产品安全性评价与风险管理提供了至关重要的科学依据。随着3D皮肤模型、人源化免疫系统小鼠模型等新技术的发展，该测试体系正朝着更高预测性、更符合人体反应的方向不断演进。