全身免疫毒性是指外源性物质（如化学品、药物、生物制剂、医疗器械浸提物等）对机体免疫系统产生的不良影响，可能导致免疫抑制、免疫原性改变、超敏反应或自身免疫等后果。对其进行系统性、标准化的测定，是药物非临床安全性评价、化学品风险评估及生物材料相容性研究的关键环节。一套完整的全身免疫毒性评估体系通常涵盖多项检测项目，采用多样化的检测方法，并需依托精密的仪器平台。
全身免疫毒性测定并非单一指标，而是一个包含功能学、细胞学、血清学和分子生物学的综合评估体系。核心检测项目及原理如下：
1. 免疫器官重量与组织病理学分析
这是最基础的检测项目。主要检测胸腺、脾脏、淋巴结、骨髓等免疫器官的绝对重量和相对重量（器官/体重比）。重量变化是免疫抑制或刺激的敏感指标。组织病理学检查则在镜下观察上述器官的结构变化，如淋巴细胞数量、分布、增殖情况，以及有无坏死、萎缩或增生，为功能改变提供形态学依据。
2. 外周血免疫细胞表型分析
利用流式细胞术，对外周血中的淋巴细胞及其亚群进行定量分析。关键指标包括：
T淋巴细胞亚群： 检测CD3⁺（总T细胞）、CD4⁺（辅助性T细胞）、CD8⁺（细胞毒性T细胞）的百分比和绝对值，以及CD4⁺/CD8⁺比值。比值失衡提示免疫功能紊乱。
B淋巴细胞： 检测CD19⁺或CD20⁺细胞，评估体液免疫功能的基础状态。
NK细胞： 检测CD16⁺CD56⁺细胞，反映天然免疫杀伤能力。
原理： 基于抗原-抗体特异性结合，用不同荧光素标记的单克隆抗体对细胞表面标志物进行染色，通过流式细胞仪进行多参数快速定量分析。
3. 淋巴细胞增殖能力测定
评估淋巴细胞在受到特异性或非特异性刺激后分裂增殖的能力，是检测细胞免疫功能的核心。
方法：
³H-胸腺嘧啶核苷（³H-TdR）掺入法： 淋巴细胞在刺激原（如刀豆蛋白A、植物血凝素用于T细胞；脂多糖用于B细胞）作用下增殖，DNA合成增加，此时掺入的³H-TdR会被摄入新合成的DNA中。通过液体闪烁计数仪测定放射性强度，反映增殖水平。该方法灵敏、经典，但涉及放射性物质。
5-溴-2'-脱氧尿嘧啶（BrdU） ELISA法： BrdU在增殖期替代胸腺嘧啶掺入DNA，通过酶联免疫吸附法检测掺入的BrdU，以光密度值表示增殖程度。避免了放射性污染。
羧基荧光素二乙酸琥珀酰亚胺酯（CFSE）染色法： 用荧光染料CFSE预染淋巴细胞，细胞每分裂一次，荧光强度减半，通过流式细胞仪分析荧光衰减的代数，可直观反映增殖能力和分裂次数。
4. 体液免疫功能测定
评估机体产生特异性抗体的能力。
T细胞依赖性抗体反应（TDAR）： 被视为评价体液免疫功能的“金标准”。动物被免疫一种T细胞依赖性抗原（如绵羊红细胞、钥孔嘧血蓝蛋白），一段时间后测定血清中针对该抗原的特异性抗体（IgM, IgG）滴度。
检测方法：
酶联免疫斑点法（ELISPOT）： 直接在细胞水平检测分泌特异性抗体的B细胞频率。
酶联免疫吸附法（ELISA）： 最常用，定量检测血清中特异性抗体的浓度。
血凝试验： 针对如绵羊红细胞等抗原，通过观察红细胞凝集效价来半定量抗体水平。
5. 天然免疫/非特异性免疫功能测定
自然杀伤（NK）细胞活性测定： 通常采用乳酸脱氢酶释放法或流式细胞术。将效应细胞（脾细胞）与标记的靶细胞（如YAC-1细胞）共孵育，检测靶细胞被NK细胞裂解后释放的乳酸脱氢酶或荧光信号的变化，计算杀伤活性百分比。
巨噬细胞/中性粒细胞功能： 可检测其吞噬功能（如使用荧光微球或细菌）、产生活性氧的能力以及细胞因子分泌谱。
6. 细胞因子与炎症介质谱分析
细胞因子是免疫细胞间通讯的关键信号分子，其谱系变化能灵敏反映免疫系统的激活或抑制状态。
方法：
多重微球流式免疫检测： 可同时定量检测数十种细胞因子（如IL-2, IL-4, IL-6, IFN-γ, TNF-α等），通量高，用样量少。
ELISA： 单因子检测，传统但可靠。
实时荧光定量PCR： 检测细胞因子mRNA的表达水平，从基因转录层面进行评估。
7. 宿主抵抗力试验
通过观察机体对病原体或肿瘤细胞的抵抗能力，整体评价免疫系统的综合功能。常用模型包括：
细菌感染模型： 如李斯特菌、链球菌攻击。
病毒感染模型： 如流感病毒攻击。
寄生虫感染模型： 如疟原虫感染。
同系肿瘤细胞攻击模型： 如B16F10黑色素瘤细胞、PYB6肉瘤细胞。
观察终点包括动物存活率、存活时间、病原体载量或肿瘤重量/数量。
药物研发： 新药（尤其是免疫调节剂、生物制剂、细胞治疗产品）的临床前安全性评价，必须根据ICH S8等指导原则进行免疫毒性筛选和表征。治疗自身免疫病、肿瘤、慢性感染性疾病的药物是重点关注对象。
化学品与农药风险评估： 依据OECD测试指南（如TG 407, TG 443），对工业化学品、农药、化妆品原料等进行免疫毒性筛查，是监管注册的必备数据。
医疗器械与生物材料评价： 根据ISO 10993系列标准，评估植入或接触式医疗器械及其浸提物是否引起超敏反应、慢性炎症或全身性免疫抑制/刺激。
环境污染物研究： 评估持久性有机污染物、重金属、空气颗粒物等环境因素对人群或野生动物的免疫系统潜在危害。
功能性食品与保健品评价： 声称具有“增强免疫力”功能的产品，需通过规范的免疫学指标进行科学验证。
全身免疫毒性测定通常采用分层测试策略：
第一层（筛选层）： 在重复给药毒性试验中整合关键指标，包括免疫器官重量与病理、血液学（白细胞分类计数）、临床生化（球蛋白）及初步的免疫细胞表型分析。任何异常发现将触发第二层测试。
第二层（表征层）： 针对第一层发现的线索，进行深入的机制研究。可能包括全面的TDAR试验、淋巴细胞增殖试验、NK细胞活性测定、细胞因子谱分析，甚至宿主抵抗力试验，以明确毒性类型、剂量反应关系和机制。
流式细胞仪： 核心设备。用于高速、多参数分析细胞大小、颗粒度及表面/胞内蛋白表达。其前向/侧向散射光检测器及多色荧光检测通道，是实现免疫细胞分型、增殖分析、细胞因子细胞内染色及细胞凋亡检测的基础。
酶标仪： 基于吸光度、荧光或化学发光原理进行检测，是执行ELISA、细胞增殖（BrdU, MTT）及部分酶活性测定不可或缺的仪器，实现高通量、自动化的微孔板读数。
液体闪烁计数仪： 专用于测量放射性同位素（如³H, ¹⁴C）衰变发出的低能β射线。是传统³H-TdR掺入法检测淋巴细胞增殖的必需设备。
自动血液分析仪： 快速提供全血细胞计数及白细胞五分类结果，是筛查免疫系统基本状态（如白细胞总数、淋巴细胞绝对数）的首要工具。
实时荧光定量PCR仪： 在核酸扩增过程中通过荧光信号实时监测靶标基因（如细胞因子、免疫相关基因）的扩增情况，实现mRNA表达的绝对或相对定量，用于分子机制探讨。
多功能微孔板检测系统： 整合了光吸收、荧光、发光、时间分辨荧光等技术于一体，可灵活用于多种细胞功能与生化检测，提高实验效率。
病理切片扫描与分析系统： 将传统病理切片数字化，便于远程审阅、长期存档，并可通过图像分析软件对特定细胞区域进行定量分析，提高病理评估的客观性和精确度。
综上所述，全身免疫毒性测定是一个多层次、多技术的综合性评价体系。在实际应用中，需根据受试物的特性、暴露途径及监管要求，科学选择和组合不同的检测项目与方法，并依托先进的仪器平台，方能全面、准确地评估外源性物质对免疫系统的潜在影响，为风险管理提供坚实的数据支持。